FISH檢測原理是什么？與ddPCR應用的區(qū)別？
發(fā)布時間：
2023-03-27
FISH的檢測原理
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization)，簡稱FISH。基本原理：應用熒光染料標記探針DNA，變性成單鏈后與變性后的染色體或細胞核靶DNA按照堿基互補的原則進行雜交，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸，在熒光顯微鏡下觀察并記錄結果。
FISH檢測原理是什么？與ddPCR應用的區(qū)別？
由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而探針可以直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和實現多重染色等特點。
ddPCR原理簡介
微滴式數字PCR(ddPCR)在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后，逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。
FISH檢測原理是什么？與ddPCR應用的區(qū)別？
適合于拷貝數變異研究、復雜來源樣品中含量極低核酸分子的檢測、NGS數據驗證、NGS測序文庫的鑒定、miRNA等差異微小的基因表達研究。
FISH與ddPCR應用比較：
FISH是傳統(tǒng)的活檢，依賴于患者原發(fā)組織，在臨床中可以檢測CNV、Fusion等;ddPCR是新興的活檢技術，因其靈敏度高，一般用于SNP位點的液體活檢，也有如MET和HER2等擴增檢測。例如，HER2檢測可以對乳腺癌患者能否用靶向藥物赫賽汀進行建議，FISH是HER2檢測的金標準，而ddPCR技術通過血液檢測用以幫助難以獲取組織的患者提供用藥指導，彌補了應用條件上的不足。
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